蜂蜜中四環素類藥物殘留檢測的固相萃取方法

（FineTech® HLB）

一、實驗目的

本研究利用固相萃取作為樣品前處理方法，HPLC作為分析方法，檢測蜂蜜樣品中四環素類抗生素的殘留水 平。該方法操作簡便，可簡化樣品前處理過程，減少有機溶劑的使用。

二、實驗目標物
土黴素(CAS:79-57-2)，四環素（CAS: 60-54-8）。

三、應用範圍

本方法適用於蜂蜜中四環素類的固相萃取及HPLC檢測與確證。

四、實驗材料

FineTech® HLB固相萃取柱60mg/3mL(Cat.No.COHLB360)。

五、實驗方法

1.樣品提取

稱取混勻蜂蜜試樣5 g(精確到0.01 g)，置於50 mL離心管中，用0.1 mol/L EDTA-Mcllvaine 緩衝液溶解並定容至50 mL，漩渦混合1 min，冰水浴超聲10 min，轉移至50 mL離心管中，冷卻至0 ℃-4 ℃，5000 r/min離心10 min(溫度低於15 ℃)，用中速濾紙過濾待淨化。

2、SPE柱淨化

(1)活化：HLB柱依次用5 mL甲醇和5 mL水活化。 (2)上樣和洗脫：準確吸取10 mL備用液以1滴/秒的速度過HLB固相萃取柱，待樣液全部流出後，依次用5 mL水和5 mL甲醇-水(5: 95, v/v)淋洗，棄去全部流出液。 2.0 kPa以下減壓抽乾5 min，最後用10 mL甲醇-乙酸乙酯溶液 (1:9, v/v)洗脫，收集洗脫液。
(3)重新溶解：洗脫液於40 ℃氮氣吹乾，加10 mmol/L三氟乙酸水溶液1.0 mL溶解殘餘物，濾膜過濾，供高效液相 色譜測定。

3、HPLC條件

設備：Waters Alliance 2690
色譜柱：Welch Ultimate XB-C18 (4.6X250 mm)
檢測器：Waters 2487 紫外檢測器
檢測波長：350 nm
流動相：A: 乙腈 B:10mmol/L三氟乙酸水溶液

洗脫方式：梯度洗脫

表1 梯度洗脫條件

流速：1 mL/min

柱溫：室溫

進樣體積：20 μL

六、實驗結果

1、蜂蜜基質中添加1mg/kg四環素的回收結果

表2 蜂蜜基質中添加1mg/kg四環素的回收結果

2、 添加水平為1mg/kg蜂蜜中四環素檢測色譜圖

圖1 添加水平為1mg/kg蜂蜜中四環素檢測色譜圖