牛奶中氫化可的鬆檢測的固相萃取方法

（FineTech® Silica）

一、實驗目的

本研究利用固相萃取法作為樣品前處理方法，HPLC法作為檢測手段。該方法操作方便，可簡化樣品的前處理 過程，節省有機溶劑的使用。

二、實驗目標物
氫化可的鬆(CAS:50-23-7)

三、應用範圍

本方法適用於牛奶中氫化可的鬆的檢測及確證。

四、實驗材料

FineTech® Silica固相萃取柱500mg/6mL(Cat.No.COSIL6500)。

五、實驗方法

1.樣品提取

稱取牛奶試料5 g於50 mL離心管中，加30 mL乙酸乙酯，均質1 min，350 r/min搖床振動20 min，4200 r/min離心10 min，移取乙酸乙酯層。殘渣中加乙酸乙酯25 mL，均質1 min，350 r/min搖床振動20 min，4200 r/min離 心10 min，移取乙酸乙酯層。合併兩次提取液，40 ℃旋轉至近幹，加乙酸乙酯1 mL和正己烷5 mL，溶解殘渣， 待淨化。

2、SPE柱淨化

(1)活化：用6 mL正己烷活化Silica固相萃取柱。

(2)上樣和洗脫：取待測液，通過Silica固相萃取小柱富集，棄去流出液。用6 mL正己烷淋洗固相萃取柱，真空 抽乾5 min，棄去流出液。用6 mL正己烷-丙酮(6:4, v/v)洗脫萃取柱，收集洗液。

(3)重新溶解：洗脫液於40 ℃氮氣吹乾，加20%乙腈水溶液2.0 mL溶解殘餘物，過0.22 μm濾膜，供高效液相 色譜測定。

3、HPLC條件

設備：Waters Alliance 2690

檢測器：Waters 2487 雙波長檢測器檢測波長：254 nm

色譜柱：Welch Ultimate XB-C18 (4.6X250mm)

流動相：A：乙腈B：0.1%甲酸水溶液

洗脫方式：梯度洗脫

表1 梯度洗脫條件

流速：1 mL/min

進樣體積：20 μL

六、實驗結果

1、 牛奶中氫化可的鬆的1mg/kg添加回收結果

表2 牛奶中氫化可的鬆的1mg/kg添加回收結果

2、 添加水平為1mg/kg牛奶中氫化可的鬆檢測色譜圖

圖1 添加水平為1mg/kg牛奶中氫化可的鬆檢測色譜圖