動物源食品中硝基呋喃類代謝物殘留檢測的固相萃取方法

（FineTech® HLB）

一、實驗目的

本法為以FineTech®  HLB(60mg/3mL)柱開發的針對動物源食品(豬肉、牛肉、雞肉、豬肝和水產品)中硝基呋喃類代謝物殘留檢測的樣本前處理淨化方法，HPLC法作為檢測手段。 Copure™ HLB(60mg/3mL)柱淨化效果良 好，回收率滿足測試要求，重現性好，與知名廠商同型號柱性能相當。

二、實驗目標物
土黴素(CAS:79-57-2)，四環素(CAS:60-54-8)，金黴素(CAS:57-62-5)，強力黴素(CAS:564-25-0)

三、應用範圍

本方法適用於動物源性食品中四環素類藥物多殘留的HPLC檢測及確證。

五、實驗材料

FineTech®  HLB固相萃取柱60mg/3mL(Cat.No.COHLB360)；W品牌HLB固相萃取柱60mg/3mL。

六、實驗方法

1.樣品提取

稱取混勻牛奶試樣5 g(精確到0.01 g)，置於50 mL離心管中，用0.1 mol/L EDTA-Mcllvaine 緩衝液溶解並定容至50 mL，漩渦混合1 min，冰水浴超聲10 min，轉移至50 mL離心管中，冷卻至0 ℃-4 ℃，5000 r/min離心10 min(溫度低於15 ℃)，用快速濾紙過濾待淨化。

2、SPE柱淨化

(1)活化：HLB柱依次用5 mL甲醇和5 mL水活化。

(2)上樣和洗脫：準確吸取10 mL備用液過HLB固相萃取柱，待樣液全部流出後，依次用5 mL水和5 mL甲醇水（1:9，v/v）淋洗，棄去全部流出液。 2.0kPa以下減壓抽乾5 min，最後用10 mL甲醇-乙酸乙酯(5:95, v/v)洗脫， 收集洗脫液。

(3)重新溶解：洗脫液於40 ℃氮氣吹乾，加10 mmol/L三氟乙酸水溶液1.0 mL溶解殘餘物，濾膜過濾，供高效液相 色譜測定。

3、HPLC條件

設備：Waters Alliance 2690

檢測器：Waters 2487 雙波長檢測器；檢測波長：268nm

色譜柱：Welch Ultimate XB-C18 (4.6X250mm)

流動相：A:乙腈B:10 mmol/L三氟甲酸水溶液洗脫方式：梯度洗脫

表1 洗脫梯度條件

流速：1 mL/min
柱溫：室溫
進樣體積:20 µL

七、實驗結果

1、0.8mg/kg牛奶基質中四環素的添加回收結果

表2 0.8mg/kg牛奶基質中四環素的添加回收結果

表3 W品牌0.8mg/kg牛奶基質中四環素的添加回收結果

2、 添加水平為0.8mg/kg牛奶基質中四環素檢測色譜圖

圖1 添加水平為0.8mg/kg牛奶基質中四環素檢測色譜圖