水產品中孔雀石綠檢測的固相萃取方法

產品介紹

商品名稱:

水產品中孔雀石綠檢測的固相萃取方法

規格介紹:

水產品中孔雀石綠檢測的固相萃取方法

(FineTech® ALA

一、實驗目的

本研究利用固相萃取法作為樣品的前處理方法,HPLC法作為分析方法,檢測水產品中孔雀石綠含量。該方法 可簡化樣品的前處理過程,節省有機溶劑的使用,操作簡便。

二、實驗目標物
孔雀石綠(CAS:569-64-2) 。

三、應用範圍

本方法適用於水產品中孔雀石綠的檢測的HPLC檢測及確證。

、實驗材料

FineTech® 酸性氧化鋁固相萃取柱1000mg/3mL(Cat. No. COALA31000)。

五、實驗步驟

1.樣品提取

準確稱取魚肉樣品5.0 g於50 mL離心管1中, 加入1.5 mL 20%的鹽酸羥胺,2.5 mL 1.0 mol/L的對甲苯磺酸溶液, 5.0 mL乙酸鈉-對甲苯磺酸緩衝液(4.95 g無水乙酸鈉及0.95 g 對-甲苯磺酸於950ml水中,用乙酸調pH至4.5,用水定容至1 L),勻漿機均質30 s(10000 r/min)。加入10 mL乙腈,劇烈振搖30 s。加入5 g酸 性氧化鋁,震盪30 s。離心機離心10 min(3000 r/min),取上清液轉移至預先加好10 mL水、2 mL二甘醇的離 心管2中。加入10 mL乙腈至離心管1中,重複上述提取一次,合併乙腈層。
離心管2中加入15 mL二氯甲烷,振盪10 s,離心10 min(3000 r/min),取二氯甲烷層於梨形瓶中。繼續用 5 mL乙腈、10 mL二氯甲烷重複上述提取一次,合併兩次提取的二氯甲烷層。將提取液45 ℃旋轉蒸發至1 mL, 再用2.5 mL乙腈溶解,待淨化。

2、SPE柱淨化

(1) 活化:酸性氧化鋁固相萃取柱使用前用5 mL乙腈活化。
(2) 上樣和洗脫:將梨形瓶中的待淨化液轉移至柱中淨化,梨形瓶使用2.5 mL×2的乙腈洗滌瓶兩次,把洗滌液依次通過柱子,整個上樣過程保持流速不超過0.6 mL/min,收集全部流出液。
(3) 重新溶解:流出液45 ℃氮吹至近幹,用1 mL乙腈定容,過0.45 μm濾膜,待上機測試。

3、HPLC條件

設 備:Waters Alliance 2690
色譜柱 :Welch Ultimate XB-C18 (4.6×250 mm,5μm)
檢測器 :Waters 2487 紫外檢測器
流動相:A:乙腈 B:0.05 mol/L乙酸銨緩衝溶液
洗脫方式:梯度洗脫

表1 梯度洗脫條件

時間(min)%A%B
--6040
36040
3.18020
108020
10.16040
136040

流速:1.2 mL/min
檢測波長:618 nm
進樣體積:50 μL

六、實驗結果

1、0.1 mg/kg魚肉中孔雀石綠的添加回收結果

表2 0.1mg/kg魚肉中孔雀石綠的添加回收結果

名稱  回收率(%) 平均回收率(%) RSD(%) 
123
孔雀石綠93.494.492.893.50.86

2、 添加水平為0.1 mg/kg魚肉中孔雀石綠檢測的液相色譜圖

圖1 添加水平為0.1 mg/kg魚肉中孔雀石綠檢測的液相色譜圖

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