飼料中苯甲酸檢測的固相萃取方法
產品介紹
飼料中苯甲酸檢測的固相萃取方法
飼料中苯甲酸檢測的固相萃取方法
飼料中苯甲酸檢測的固相萃取方法
(Copure™ MAX)
一、實驗目的
本研究利用固相萃取法作為樣品的前處理方法,HPLC法作為分析方法,檢測飼料中苯甲酸含量。該方法可簡 化樣品的前處理過程,節省有機溶劑的使用,操作簡便
二、實驗目標物
苯甲酸 (CAS:65-85-0)
三、應用範圍
本方法適用於飼料中苯甲酸的檢測的HPLC檢測及確證。
四、實驗材料
Biocomma® Copure™ MAX 固相萃取柱60mg/3mL(Cat. No. COMAX360)。
五、實驗步驟
1.樣品提取
準確稱取飼料樣品2.0 g於50 mL離心管中,加入2% 氨水水溶液(v/v)21 mL,超聲提取10 min,振盪提取10 min,準確加入0.25 mol/L的亞鐵氰化鉀溶液2 mL、1 mol/L的乙酸鋅溶液2 mL,渦旋混勻。 5000 r/min離心5 min,取上清液5 mL轉移至25 mL容量瓶中,用2% 氨水水溶液(v/v)定容至25 mL,備用。
2、SPE柱淨化
(1) 活化:MAX 固相萃取柱使用前用3 mL甲醇、3mL 水活化。
(2) 上樣和洗脫:在MAX固相萃取柱上加入5 mL備用樣品,棄去流出液; 用3 mL 2% 氨水水溶液(v/v)、3 mL甲醇淋洗,棄去淋洗液;抽乾小柱;用5% 甲酸甲醇溶液(v/v)2 mL洗脫,收集洗脫液(整個上樣、洗脫過程保持流速1 mL/min)。 (3) 重新溶解:洗脫液過0.45 μm濾膜,上機測試。
3、HPLC條件
設 備:Waters Alliance 2690
色譜柱 :Welch Ultimate XB-C18 (4.6×250 mm, 5μm)
檢測器 :Waters 2487 紫外檢測器
流動相 :A:乙腈 B:磷酸鹽緩衝溶液(稱取磷酸二氫鉀 2.5g+磷酸氫二鉀 2.5g,加水溶解定容到1000mL)
洗脫方式:等度洗脫A:B=10:90
流速:1.0 mL/min
檢測波長:230 nm
進樣體積: 20 μL
六、實驗結果
1、25 mg/kg牛奶中苯甲酸的添加回收結果
表1 牛奶中苯甲酸25 mg/kg添加回收结果
目標物 | 回收率(%) | 平均 回收率(%) | RSD(%) | ||
1 | 2 | 3 | |||
苯甲酸 | 98.11 | 99.00 | 103.12 | 100.08 | 2.67 |
2、 添加水平為25 mg/kg飼料中苯甲酸檢測的液相色譜圖
圖1 添加水平為25 mg/kg飼料中苯甲酸檢測的液相色譜圖