牛奶中氯黴素檢測的固相萃取方法

（FineTech® C18）

一、實驗目的

本研究利用固相萃取作為樣品前處理方法，HPLC作為分析方法，檢測牛奶樣品中的氯黴素殘留水平。該方法 操作簡便，可簡化樣品前處理過程，減少有機溶劑的使用。

二、實驗目標物
氯黴素(CAS:56-75-7)。

三、應用範圍

本方法適用於動物源性食品中氯黴素的檢測的HPLC檢測及確證。

四、實驗材料

FineTech® C18固相萃取柱500mg/6mL(Cat.No.COC186500)。

五、實驗方法

1.樣品提取

準確稱取牛奶5 g(精確到0.001 g)，加入乙酸乙酯15 mL，渦旋振盪1 min，搖床振盪10 min。 3000 r/min轉速離 心10 min。將上清液轉移至試管中，於45 ℃氮吹吹乾，用5 mL乙腈-水溶液(5:95, v/v)溶解，待淨化。

2、SPE柱淨化

(1)活化：C18固相萃取柱使用前依次使用5 mL甲醇和5 mL水活化。

(2)上樣和洗脫：將待淨化液加入已活化好的固相萃取柱中，以1 mL/min的流速過柱，棄去濾液。用2x4 mL乙 腈-水溶液(5:95, v/v)淋洗固相萃取柱，棄去淋洗液，抽乾10 min。用8 mL乙酸乙酯洗脫固相萃取柱，收集洗 脫液。

(3)重新溶解：洗脫液於45 ℃氮吹吹乾，用1 mL乙腈-水溶液(2:8, v/v)定溶，0.22 μm微孔濾膜過濾，供高效液 相色譜測定。

3、HPLC條件

設備：Waters Alliance 2690

色譜柱：Welch Ultimate XB-C18 (4.6X250 mm)

檢測器：Waters 2487 紫外檢測器

檢測波長：268 nm

流動相：A：水 B：甲醇

洗脫方式：等度洗脫

表1 等度洗脫條件

六、實驗結果

1、牛奶基質中氯黴素的0.5mg/kg添加回收結果

表2 牛奶基質中氯黴素的0.5mg/kg添加回收結果

2、 添加水平為0.5mg/kg牛奶基質中氯黴素檢測色譜圖

圖1 添加水平為0.5mg/kg牛奶基質中氯黴素檢測色譜圖