豬肉中獸藥多殘留檢測的固相萃取方法
產品介紹
豬肉中獸藥多殘留檢測的固相萃取方法
規格介紹:豬肉中獸藥多殘留檢測的固相萃取方法
豬肉中獸藥多殘留檢測的固相萃取方法
(FineTech® HLB)
一、實驗目的
本研究針對豬肉中多種獸藥殘留同時檢測的目的,開發了經過優化的固相萃取前處理方法和HPLC分析方法。待測物質為主要的抗生素獸藥種類中具有代表性的化合物,包括磺胺類、四環素類、喹諾酮類、氯黴素類。
二、實驗目標物
麻保沙星(CAS:115550-35-1),雙氟沙星(CAS:98106-17-3),土黴素(CAS:79-57-2),氟苯尼考(CAS:73231- 34-2),磺胺多辛(CAS:2447-57-6),磺胺間二甲氧嘧啶(CAS:155-91-9),氯黴素(CAS:56-75-7)
三、應用範圍
本方法適用於豬肉中多種獸藥殘留的檢測的HPLC檢測及確證。
四、實驗材料
FineTech® HLB 固相萃取柱60mg/3mL(Cat. No. COHLB360)。
五、實驗步驟
1.樣品提取
準確稱取豬肉3 g於50 mL離心管中,加入0.1 mol/L的EDTA-Mcllvaine溶液15 mL,漩渦搖勻1 min,冰水浴超聲10 min,控製樣品溫度<15 ℃;5000 r/min離心8 min。取上清液,重複提取一次,合併清液、快速濾紙過 濾,備用。
2、SPE柱淨化
(1)活化:HLB固相萃取柱使用前用3 mL甲醇、3 mL水活化 。
(2)上樣和洗脫:在HLB固相萃取柱上加入10 mL備用樣液,棄去流出液, 用3 mL 5%甲醇水溶液(v/v)淋洗,棄去淋洗液,抽幹小柱;用8 mL甲醇-乙酸乙酯溶液(1:9,v/v)洗脫,收集洗脫液(整個上樣、洗脫過程保持流速2 mL/min) 。 (3)重新溶解:洗脫液40 ℃氮吹吹乾,1 mL甲醇定容,過0.45 μm濾膜,上機測試
3、HPLC條件
設 備:Waters Alliance 2690
色譜柱 :Welch Ultimate XB-C18 (4.6×250 mm, 5 μm )
檢測器 :Waters 2487 紫外檢測器
流動相 :A:乙腈 B: 0.1%甲酸水溶液(v/v)
洗脫方式:梯度洗脫
表1 洗脫梯度條件
時間(min) | %A | %B |
0 | 10 | 90 |
6 | 10 | 90 |
29 | 30 | 70 |
30 | 100 | 0 |
36 | 100 | 0 |
37 | 10 | 90 |
42 | 10 | 90 |
流速:1.0 mL/min
檢測波長:270 nm
進樣體積: 20 μL
六、實驗結果
1、4 mg/kg豬肉中多種獸藥的添加回收結果
表2 4 mg/kg豬肉中多種獸藥的添加回收結果
目標物 | 回收率(%) | 平均 回收率(%) | RSD(%) | ||
1 | 2 | 3 | |||
氟苯尼考 | 98.67 | 104.3 | 104.15 | 102.37 | 3.13 |
土黴素 | 113.4 | 110.75 | 108.75 | 110.97 | 2.1 |
氯黴素 | 100.56 | 101.2 | 97.73 | 99.83 | 1.85 |
磺胺多辛 | 85.56 | 82.86 | 83.18 | 83.87 | 1.76 |
磺胺間二甲氧嘧啶 | 88.6 | 86.2 | 85 | 86.6 | 2.12 |
麻保沙星 | 87.88 | 90.23 | 84.2 | 87.44 | 3.48 |
雙氟沙星 | 84.88 | 92.13 | 93.6 | 90.2 | 5.18 |
2、 添加水平為4 mg/kg豬肉中多種獸藥檢測的液相色譜圖
圖1 添加水平為4 mg/kg豬肉中多種獸藥檢測的液相色譜圖